环亚集团·AG88 提供的人恶性黑色素瘤细胞WM115培养说明书详尽阐述了细胞的培养条件、处理步骤及相关注意事项，确保研究人员在实验过程中能够顺利进行细胞培养和管理。

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞WM115
生长特性：贴壁
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议采用1:2比例进行传代
备注：在培养过程中，使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买环亚集团·AG88提供的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，在培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方法。接收细胞时，需用75%酒精喷洒整个细胞瓶，确保消毒。将其放入超净台进行严格无菌操作，并置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存（强烈建议在40x、100x和200x倍数下分别拍摄一张），前三天的照片将作为售后依据，不提供照片则默认为收到的状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

如果细胞汇合度未超过80%，需将培养液收集至离心管中，并保留5ml培养基在37℃、5% CO2进行培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。当细胞大部分变圆脱落时，迅速轻敲瓶子后加入至少5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞收缩变圆后立即加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的环亚集团·AG88无血清冻存液，混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时后再进行转移。

c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

由于部分细胞贴壁性不强，运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。如脱落数量较多，可将培养液收集至离心管，离心后进行相应处理并重悬细胞。具体实施可参考上述细胞传代流程。

五、售后条款

1）细胞出现问题可重发的情况：

1. 细胞在运输途中出现问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏出，均可重发；
2. 若细胞发生污染，请在收到后48小时内提供真实实验结果以申请重发；
3. 常温运输的细胞在静置24小时或干冰运输的细胞在复苏后24小时仍未存活，需提供清晰的细胞状态照片，符合条件的可重发；
4. 细胞污染问题，一旦确认可重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况：

1. 因客户原因造成的细胞污染，不予重发；
2. 操作不当导致细胞状态不佳的情况，不予重发；
3. 不遵循本库推荐的培养体系致使细胞状态不良，不予重发；
4. 未提供细胞培养前3天照片的，也不予重发；
5. 细胞在培养时经其他处理的，不予重发。

请遵循上述培养和管理步骤，以保证您在实验中的成功。感谢您选择环亚集团·AG88作为您的实验室细胞供应商。